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支原体蛋白提取试剂盒适用于从各种支原体中提取总蛋白。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。提取的蛋白具有天然活性，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、质谱等各种下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用百奥莱博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用蛋白脱盐柱处理）。

• 使用方便，将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
  
• 本品不含EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

• 试剂瓶开盖后各组分按要求条件保存。
  
• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完！

• 仪器准备：离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：PBS缓冲液(pH7.4)、蛋白定量试剂盒
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液准备：每500μL提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  
  • 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    
  • 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
    
  • 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
• 收集好的支原体样本用PBS洗涤后，加入300～500μL冷的提取液A，充分混匀。
  
• 置2～8℃条件下振荡20～30分钟。至支原体裂解完全，沉淀体积明显减少。
  
  • 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
    
  • 如果没有2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃冰箱静置，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
    
  • 有条件可以用匀浆机/匀浆器进行匀浆处理。
• 将蛋白提取液在2～8℃低温下12000×g离心5～10分钟，取上清。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得支原体蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  
  • 建议用BCA法进行蛋白定量，推荐BCA法蛋白定量试剂盒。
    
  • 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  
  • 支原体蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大样本的上样量以提高蛋白浓度。
    
  • 处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。